Mark Ruffalo 1967. november 22-én született Kenoshában, az Egyesült Államokban, fodrásznő és szobafestő gyermekeként. Olasz és kanadai francia felmenőkkel rendelkezik. Virginia Beach-en, San Diegóban majd Los Angelesben töltötte gyerekkori éveit. A Stella Adler Conservatoryn végezte tanulmányait, és az Opheus Theatre Company egyik alapító tagja volt. A színjátszás mellett pultosként kereste kenyerét. Kisebb szerepeket kapott filmekben is: 1996-ban a Dr. Halálben, majd a Széf fiúkben és az 54-ben (1998) is feltűnt. Kenneth Lonergannel való találkozása indította el a siker útján, az író számos sikeres darabjában szerepet kapott, majd a könyvén alapuló Számíthatsz rám-ben (2000) hívta fel magára a szakma figyelmét. Már ekkor a fiatal Marlon Brandohoz hasonlították. Ettől kezdve már jelentősebb szerepeket kapott. Játszott az XX/XY (2002) című romantikus drámában, Jane Campion Nyílt sebjében (2003) Meg Ryan oldalán, vagy Michel Gondry kultikus, Egy makulátlan elme örök ragyogása (2004) című filmjében. A Michael Mann rendezésében készült Collateral - A halál záloga (2004) című sikeres thrillerben drogfüggő nyomozót alakított, majd Zodiákusban (2007), David Fincher bűnügyi drámájában szintén a nyomozó szerepében láthattuk. A 2008-as év igen sikekes volt Ruffalo számára: a The Brothers Bloom (2008) című bűvészfilmben Adrien Brodyval és Rachel Weisz-szel alkottak triót, de a Saramago-adaptációban, a Vakságban is meggyőző alakítását nyújtott Julianne Moore oldalán. 2010-ben újabb sikerkes filmekben láthattuk: a Martin Scorsese rendezésében készült Viharszigetben, valamint az Oscar-díjas A gyerekek jól vannakban is szerepet kapott, utóbbiban ismét alkalma volt együtt dolgozni Julianne Moore-ral és Annette Beninggel. Alakításáért a legjobb mellékszereplő kategóriájában Oscar-díjra jelölték. A Marvel szuperprodukciójában, a Bosszúállókban (2012) a zöld behemótot, Hulkot alakította. Rendezőként sikeresen debütált a Gyógyító érintés (2011) című filmjével, mely a Sundance Filmfesztiválon a zsűri különdíját is elnyerte. Ruffalo 2000 óta házas, felesége Sunrise Coigney színésznő, akitől három gyermeke született.